试剂与器材
试剂：1、猪心；2、10%氢氧化钠溶（100 克/升）；3、硫酸铵粉末；4、20%三氯乙酸溶液（200 克/升）；5、0.145mol/L三氯乙酸溶液；6、饱和硫酸铵溶液；7、10mmol/L 铁氰化钾溶液；8、饱和连二亚硫酸钠溶液；9、0.1mol/LpH7.4 磷酸钠缓冲溶液
器材：1、大烧杯、搅拌棒；2、JB―3 型定时恒温磁力搅拌器；3、细布；4、大玻璃漏斗；5、大布氏漏斗；6、透析袋；7、6.9~8.4 Q/GHSC 1571―2006 pH 试纸；8、721分光光度计；9、HR1707飞利浦二合一搅拌机; 10、LXJ―ⅡB飞鸽牌离心机; 11、SH2―D（Ⅲ） 循环水式真空泵
验操作
⑴细胞色素C的制备取猪心若干，剔除脂肪，称重，搅碎。加入等量 0.145mol/L 的三氯乙酸溶液匀浆，搅拌提取 10min。将此混合提取物于室温下放置 2～3 小时，然后用两 层纱布过滤。用 10%氢氧化钠溶液将上述混合液调到 Ph7.3，测量并记录此抽提 液的体积，再于搅拌下慢慢地加入硫酸铵粉末（加入量按 500 克/升混合液计算）。用布氏漏斗抽滤，除去沉淀。经常更换滤纸，要防止倒灌，收集粉红色滤液。测量并记录此滤液的体积，搅拌下再加入硫酸铵粉末（加入量按 50 克/升滤液计算）。此盐析液于冰箱中放置过夜。上述盐析液经放置后出现少量沉淀，用布氏漏斗抽滤才（双层滤纸），除去沉淀，保留上清液，向上清液中加入20%三氯乙酸溶液（加入量按 25 毫升/升上清液计算），以沉淀细胞色素 C。迅速地于3500转/分条件下离心10 分钟、收集细胞色素C沉淀，再将这个砖红色的沉淀悬浮于饱和硫酸铵溶液中（饱和硫酸铵 溶液的体积按 150 毫升/公斤心肌组织计算，可根据实验操作情况减少30-50%）。将此悬浮液移于透析袋中，对水透析4-5小时，离心（3500 转/分，10 分钟）除去少量暗黄色（已变性的细胞色素 C）沉淀，红色的细胞色素 C 溶液则储于零下 15℃。记录此溶液体积。
⑵测定细胞色素 C 的产量、纯度及产率 以上制得的细胞色素 C 溶液是还原型分子与氧化型分子的混合物。下一个步 骤是用铁氰化物氧化一份样品，用连二亚硫酸盐还原另一份样品，将这两份样品于550毫微米储的消光值记录下来。根据已知的氧化型细胞色素C及还原型细胞色素C的克分子消光值及测得的样品消光值，可以计算出每个样品相当于多少克分子（E/K）。
⑶测定产品的分光光度吸收值 最后，测定细胞色素 C 溶液的光吸收峰。将操作 2 中的氧化型及还原型溶液 取来测定可见光不同波长下的吸收值，绘出吸收曲线（波长—光密度值） 。
3．结果与分析：
由实验可得，⑴心肌质量为 166.0g 的猪心可得 38.0ml 细胞色素 C 溶液； ⑵A280 的紫外吸收值为 0.956；A260 的紫外吸收值为 0.904；则蛋白质含量=1.45 A280- 0.74 A260=0.71724mg/ml ⑶若测定体积为3毫升，细胞色素C溶液体积为V,则细胞色素C氧化型及还原型的产量分别为：A550氧化型样品消光值为 0.091，则 Y1（毫克）=E1/K1×Mwt×3×V 毫升×稀释 倍数= 14.2931mg A550 还原型样品消光值为 0.108，则 Y2（毫克）=E2/K2×Mwt×3×V 毫升×稀释 倍数= 5.5115mg（细胞色素 C 分子量 Mwt 为 12400） 由以上结果可以算出：产量=（Y1+Y2）/2= 9.9023mg 产率=产量/心肌重量= 59.44mg/公斤