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呕吐毒素的检测与防治
点击率:2020   作者:合肥化学试剂,合肥实验仪器,合肥玻璃仪器,合肥标准物质,合肥色谱耗材,合肥培养基 - 合肥贝特实验用品有限公司   来源:http://www.cnbata.com   时间:2013/7/16 8:52:00

呕吐毒素(vomitoxin),又称脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON),化学名为3α, 7α, 15一三羟基草镰孢菌-9--8-酮,属单端孢霉烯族化合物。由于它可以引起猪的呕吐而得名,对人体有一定危害作用,欧盟分类标准为三级致癌物。

呕吐毒素主体成分为DON(脱氧雪腐镰刀菌烯醇),属于单端孢霉烯族化合物。单端孢霉烯族毒素共有150多种,是一类强有力免疫抑制剂,所引起典型症状是采食量降低,所以这类毒素又叫饲料拒食毒素。呕吐毒素(DON)是其中最重要一种毒素,主要来自镰刀菌属(Fusarium),尤其是禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)和黄色镰刀菌(Fusarium culmorum)。由于它可以引起猪的呕吐,故又名呕吐毒素(vomitoxinVT)。欧盟要求呕吐毒素要小于1.0mg/kg;中国饲料要求低于1ppm

生物体特征

呕吐毒素对人和动物均有很强的毒性,能引起人和动物呕吐、腹泻、皮肤刺激、拒食、神经紊乱、流产、死胎等,猪是对呕吐毒素最敏感的动物,家禽次之,反刍动物由于瘤胃微生物的作用,耐受力最强。对生长肥育猪而言,含有12~14g/t呕吐毒素的饲料饲喂后10~20min即会出现呕吐、不正常的焦虑和磨牙现象,含毒量19g/t以上即完全拒食。

呕吐毒素的产毒菌株适宜在阴凉、潮湿的条件下生长。广泛存在于大麦、小麦、玉米和燕麦中。不同动物对呕吐毒素的敏感程度不同,猪是对呕吐毒素最敏感的动物,断奶仔猪尤其敏感。。此外,呕吐毒素可在人和动物体内蓄积,具有致畸性、神经毒性、胚胎毒性和免疫抑制作用。

细胞毒性

DON具有很强的细胞毒性,它对于原核细胞、真核细胞、植物细胞、肿瘤细胞等均具有明显的毒性作用。DON可能通过3种不同的方式对原核细胞产生毒性作用:(1)通过渗透磷脂双层,作用于亚细胞水平;(2)通过与细胞膜相互作用;(3)通过自由基介导的脂质过氧化作用。DON可能以一种以上的方式同时发挥作用。

免疫毒性

研究表明,DON可能对免疫系统有影响。DON既是一种免疫抑制剂,又是一种免疫促进剂,其作用与剂量有关。在体内DON可以抑制对病原体的免疫应答,同时又可以诱发自身的免疫反应。DON引起实验动物免疫系统的疾病与人类lgA肾病及其相似,同时DON还可以诱发辅助性T细胞超诱导产物-细胞因子的产生,激活巨噬细胞、T细胞产生炎症前细胞因子。

检测方法

呕吐毒素的检测方法有薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、柱净化法结合电子捕获检测器的气相色谱法(GC/ECD)、高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)、放射性免疫测定法(RIA)等色谱法。

薄层色谱法(TLC)是GB/T5009.111-2003采取的谷物及其制品中呕吐毒素的检测方法,其检测限为1mg/kg。适用于谷物(小麦、玉米、大麦等)及其制品(蛋糕、饼干、面包等)和中呕吐毒素的测定。谷物及其制品中的呕吐毒素经乙腈-水(84:16 V/V)提取、净化、浓缩和硅胶G薄层展开后,加热薄层板。在制备薄层板时加入三氯化铝,使DON在波长365nm紫外光下显蓝色荧光,与标准比较。薄层色谱法TLC虽然操作简便,曾被广泛应用,但是,处理样品时工作量大;在检测过程中操作人员必须直接接触标准品,危害到操作人员的身体健康,而且本方法在提取过程中需要使用大量的有机溶剂,这样就会对周围环境也会产生不利影响;灵敏度差,提高灵敏度必须改进样品的提取和净化方法,改进和提高薄层色谱分析性能,这样就增加了劳动强度和检测成本。

酶联免疫吸附测定法

免疫酶技术(EIA)根据抗原抗体反应后是否需要分离结合的与游离的酶标记物而分为均相(homogenous)和异相(heterogenous)两种类型。在异相法中,又包括液相异相酶免疫测定和固相酶免疫测定二种。固相酶免疫测定也称为ELISA,是临床检验中应用较广的免疫测定方法。小分子的ELISA测定法一般有三种竞争分析模式:包被特异性抗体直接竞争法、包被抗原直接竞争法以及间接竞争法(也称为抑制性测定法)。间接竞争ELISA法的基本步骤是:包被完全抗原——同时加入已知抗体和待测抗原——加入酶标二抗——加入底物显色液。该法主要应用于未知抗原的检测。

酶联免疫吸附法(ELISA)快速、灵敏、准确、可定量、操作简便、无需贵重仪器设备,且对样品纯度要求不高,特异性强,特别适用于大批量样品的检测,发展非常迅速。简化了样品预处理和纯化过程。但是由于免疫酶的活性非常不稳定,在应用过程中很容易受到操作条件的影响,反应试剂需低温保存。在实际操作过程中很难达到这一要求,使得免疫酶的活性大大降低,从而影响到结果的准确性。应用时还必须通过多次洗涤,才能使反应产物和游离底物进行分离,影响到结果的重复性,而且检测时间较长,无法满足现场快速检测的要求。

脱毒与防治

呕吐毒素的防治首先是防止霉菌的产生,而防霉关键在于要严格控制饲料和原料的水分含量、控制饲料加工过程中的水分和温度、选育和培养抗霉菌的饲料作物品种、选择适当的种植或收获技术、注意饲料产品的包装、贮存与运输、添加防霉剂等。因此,可以根据饲料霉变的程度采取不同的方法进行脱毒处理。一般有物理脱毒法、化学脱毒法、酶解法。

物理脱毒法主要是水洗法、剔除法、脱胚去毒法、溶剂提取法、加热去毒法、辐射法等化学脱毒法主要是采用碱或氧化剂进行处理脱毒。上述的诸多脱毒方法,在实际应用中对于饲料业、养殖业来说均不适用。因其操作不但困难,且大批量的饲料及原料用此类方法是无法进行, 而且经化学脱毒处理后往往会降低饲料的营养品质和适口性。

酶解法主要是选用某些酶,利用其降解作用,使霉菌毒素破坏或降低其毒性。与物理学和化学方法相比,酶的降解处理法对饲料营养成分的损失和影响较少,但因其费用高,效果不稳定制约着该方法的广泛应用。

吸附法即在饲料里添加霉菌毒素吸附剂进行脱毒的一种方法,这种方法仍是一个比较可行的方法。但在霉菌毒素吸附剂的选用上,应认真考虑。因为吸附剂选用不当,不但起不到吸附霉菌毒素的作用,还会产生副作用。霉菌毒素吸附剂的选用,一般应考虑以下几方面因素:1)必须具备高吸附能力。原则上选择产品比表面积在600以上的吸附剂。2)选择性吸附。理想的霉菌毒素吸附剂应具备只吸附毒素,不吸附营养物质的特点。3)广谱吸附。因为通常污染原料的霉菌毒素不只一种,所以选择的霉菌毒素吸附剂一般应对多数霉菌毒素都有效。4)无副作用。

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